Bunphrionsabal na sintéise DNA

Tá an sintéis DNA ceimiceach bunaithe ar an straitéis sintéise soladach-chéim agus ar cheimic phosphoramidite.Difriúil ó shintéis DNA bitheolaíochta, is é an t-ábhar i sintéis DNA ceimiceach DMT (4, 4-dimethoxytrityl) agus fosfaramidite modhnaithe deoxyriboxyside, mar a thaispeántar i bhFíor 1. Déantar an sintéis DNA ar an tacaíocht soladach (is féidir linn a thairiscint éagsúla deColún Sintéise Oligo), ie CPG (gloine phóir rialaithe) agus PS (polaistiréin), agus déantar an tsintéis iomlán ar aSintéiseoir DNA/RNA, arb é ár bpríomhthrealamh, tá múnlaí éagsúla cosúil le: Sintéiseoir Cainéal Aonair HY, HY-12, HY-192 agus araile, tá an treo sintéise ó 3 'go 5', agus tugtar isteach nucleotide don tacaíocht soladach trí cheann amháin. timthriall sintéise.Is gnách go mbíonn ceithre chéim i dtimthriall sintéise, Díchosaint, Cúpláil, Caipeáil agus Ocsaídiú (Fíor 2).Socraítear an Deprotection chun an grúpa DMT a bhaint as an tacaíocht soladach nó an grúpa hiodrocsaile 5 'ar an nucleoside roimhe seo, úsáidtear an t-aigéad trichloroacetic 3% i déchlóraimeatán mar imoibrí díchosanta.Ansin ceadaíodh an phosphoramidite modhnaithe deoxyriboxyside grúpa hiodrocsaile a nochtadh le cúnamh activator, ie 5-ethylthiotetrazole nó 4, 5-dicyanoimidazole, a bheidh ina phosphitetriester (III), agus thuig an chéim Cúplála.Déantar céim Capping chun an grúpa hiodrocsaile neamh-imoibrithe a bhlocáil le linn na céime cúplála, chun foirmiú sraitheanna lochtanna neamh-inmhianaithe a íoslaghdú.Ar deireadh, déantar an fosfitetriester éagobhsaí (III) a ocsaídiú go fosfaróir cobhsaí ceimiceach (V) le iaidín mar ocsaídeach i láthair piridín.

D'fhéadfaí an DNA sintéiseithe a scoilteadh ón tacaíocht soladach trí aminolysis, tá an grúpa cosanta 2-cyanoethyl ar an bhfosphortriester agus an aimíd ar an nucleobase scoilte ag an am céanna, cuirtear na Plátaí Sintéise agus na Colúin Sintéise i racaí go díreach sa seomra imoibrithe. de naTrealamh Díchosanta.D'fhéadfadh HPLC, leictreafóiréis agus OPC DNA amh a ullmhú ar éileamh, is féidir linn anTrealamh Íonúcháinle haghaidh Iarphróiseála.